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多肽固相合成技术 多肽的固相合成( 二 )


铵盐型
盐缩合试剂反应性高，速度快，目前应用广泛，包括HBTU、TBTU、HATU、PyBOP等 。试剂使用过程中需要添加有机碱，如二异丙基乙胺(DIEA)和N-甲基吗啉(NMM) 。只有加入试剂后，氨基酸才能被激活 。
固相合成过程
1.以羟基树脂为载体的合成方法(以王树脂为例:图1)
王树脂、PAM树脂、树脂和Sasrin树脂都在接头结构中含有苯甲醇基团 。在大多数情况下，预先形成的N-保护氨基酸的对称酸酐和催化剂DMAP(对二甲氨基吡啶)与羟基树脂反应 。在这个结合反应中 。DMAP是必要的，但它也带来一些麻烦 。比如当一些空间位阻大、反应活性低的Fmoc-氨基酸需要较长的反应时间，DMAP的纯度不理想时 。一些Fmoc基团被除去并产生一些二肽 。更常见的危险是，当Cys和His作为C端第一个氨基酸与羟基树脂反应时，DMAP倾向于将这两个氨基酸外消旋化 。所以解决的办法就是用Cl-Trt树脂把这两个氨基酸键合起来，也可以产生酯基接头 。另一种解决方法是使用MSNT试剂[Fra I388，Ren 1998]，可以有效避免Cys和His与各种羟基树脂键合时的外消旋化危险 。
图1固相肽合成
2.以三苯甲基树脂为载体的合成方法(图2)
三苄基(trt)树脂含有三苄基结构，因此具有很高的反应活性 。通常，将等摩尔量的受保护氨基酸和4倍量的DIEA与Trt树脂在二氯甲烷中混合，在室温下30-12分钟后反应完成 。对于没有完全反应的位点，可以用甲醇封闭 。基于Trt连接体的温和键合和温和裂解的特性，在这种树脂上浓缩皮片和制备完全保护的皮片是一种理想的方法 。

图2固相肽合成
FMOC固相合成谷氨酸色氨酸
作为载体的氨基树脂的合成方法
MBHA树脂、PAL树脂、Knorr树脂、Rink-NH2树脂等 。都含有能与连接基中的羧酸反应的氨基 。在C-末端结合第一个氨基酸的反应条件与肽接枝循环中的反应条件完全相同 。如果DCC用作缩合剂，通常，N-保护的氨基酸与DCC和HOBT在溶剂(DMF、THF、DCM等)中混合 。)生成HOBT活性氨基酸酯，静置3-5小时 。活化反应基本完成后，滤出副产物DCU沉淀，将羧基活化组分溶液与氨基树脂混合进行键合反应 。这个反应有两点值得注意:①大部分氨基树脂的氨基都不是以游离状态出售的 。一些氨基以盐酸盐的形式存在，而另一些氨基则具有临时保护基团(如Fmoc、Boc等 。).因此，在与C-末端的第一个氨基酸结合之前，必须进行相应的中和或去除临时保护基团 。②氨基酸活化组分的用量应远高于氨基树脂组分的用量，一般摩尔比为(2-5): 1，才能使键合反应接近100%，因为未酰化的氨基树脂不能从产物中除去 。使用大量过量的结构单元是所有固相有机合成中常见的 。
除了DCC，其他常见的冷凝剂有DIC、EDC、EEDQ、HBTU等 。


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